Серологічне дослідження крові

Зміст

• 1 Що таке серологічне дослідження крові?
• 2 Показання до проведення аналізу.
• 3 Підготовка до дослідження.
• 4 Методи проведення серологічного дослідження.
• 5 Іммунофлюорісцентний метод.
• 6 Імуноферментний аналіз.
• 7 Які інфекції допомагає виявити серологічне дослідження.
• 8 Переваги серологічного методу дослідження в діагностиці інфекцій.

Що таке серологічне дослідження крові?

Об’єкт серологіі — антигени і антитіла

Серологічне дослідження (СІ) засновано на здатності антигенів і антитіл зв’язуватися один з одним. СІ дозволяє з точністю виявити наявність у пацієнта певного вірусу або бактерії, групу крові та резус, реактивність організму до антибіотиків, аутоімунні захворювання, гормональні порушення, індивідуальну специфічність білків, визначити ефективність терапії.
Система імунітету бореться з проникаючими в організм хвороботворними мікробами (антигенами) за допомогою антитіл, при цьому створюючи до кожного з вірусів, паразитів або бактерій свій певний тип захисту.

Антиген і антитіло підходять один одному як замкова щілина і ключ, при зустрічі вони неодмінно пов’язуються. Ця серологічна реакція дозволяє виявляти різні види антитіл або антигенів.

Здатність імунітету виробляти особливі речовини, що нейтралізують шкідливі частинки, була відома вченим давно. Але побачити реакцію антиген-антитіло в лабораторних умовах вдалося тільки в кінці XIX століття. Було виявлено, що в результаті утворення зв’язки, комплекси випадають в осад, утворюючи пластівці або помутніння. Такі реакції отримали назви аглютинації і преципітації. У XX столітті серология — наука про властивості сироватки, стрімко розвивалася, виявлялися нові методи діагностування на основі реакцій антиген-антитіло. На сьогоднішній день існує безліч способів виявлення імунних комплексів, а СІ є незамінною ланкою в діагностиці, лікуванні, створенні нових медичних препаратів і вакцин.

Показання до проведення аналізу.

серологічні дослідження широко застосовується в акушерстві

серологічні дослідження супроводжують сучасної людини протягом усього життя. Перші аналізи на виявлення певних антитіл проводяться, коли малюк знаходиться ще в утробі. Вагітна жінка здає кров на різні СІ для визначення можливого резус-конфлікту або інфекцій, здатних нашкодити виношує плоду. Коли дитина з’являється на світ, його очікують серологічні дослідження, що дозволяють діагностувати вроджені захворювання. Згодом аналізи здаються з наступних причин:

• вірусні, бактеріальні, паразитарні інфекції.
• виявлення активності, стадії розвитку хвороби.
• гормональні патології.
• безпліддя.
• аутоімунні захворювання.
• порушення обміну речовин.
• алергії.
• онкологічні захворювання.
• планування вагітності, період виношування, патології вагітних.
• виявлення ревматоїдного фактора.
• визначення групи крові і резус-фактора.
• ефективність терапії при різних хворобах.
• ефективність вакцинації.
• передопераційний і післяопераційний період при необхідності оцінки рівня деяких антитіл.
• вивчення імунного стану організму.

Підготовка до дослідження.

Прийом препаратів бажано скасувати напередодні тесту

Так як серологічні дослідження охоплюють широкий спектр аналізів, в кожному конкретному випадку може знадобитися певна підготовка, але існують загальні правила здачі серологічного тесту:

• За добу до дослідження слід обмежити в раціоні жирне і смажене, виключити алкоголь.
• Останній прийом їжі повинен завершитися за 10 — 12 годин до аналізу.
• У день здачі крові не слід вживати каву, чай або інші напої. Можна в невеликій кількості пити чисту воду.
• Лікарські засоби перед аналізом виключаються. Якщо прийом не підлягає скасуванню, необхідно надати лікаря повний перелік препаратів, в тому числі вітамінів, пероральних контрацептивів.
• Все інші дослідження або медичні маніпуляції проводяться після СІ.
• Куріння рекомендується припинити за 12 годин до взяття зразка крові.
• у попередній день слід уникати фізичних і емоційних навантажень, а перед дослідженням бажано 15 хвилин посидіти в повному спокої.
• СІ призначаються на ранковий час і здаються натщесерце.

Методи проведення серологічного дослідження.

В серологіі може застосовуватися велике число методів

Все методики визначення комплексів антиген-антитіло (Аг-Ат) грунтуються на використанні відомого Аг або Ат в пошуку невідомого. Якщо необхідно виявити Аг, необхідні діагностичні імунні сироватки з вмістом специфічних Ат. Якщо метою СІ є виявлення Ат, використовуються діагностикуми — суспензії, що містять певні Аг.

Серологічні аналізи можуть відображати якісний або кількісний результат. При якісному дослідженні підсумок може бути негативний або позитивний, тобто шуканий елемент або виявлений, або ні. Кількісний підсумок виражається у вигляді числового значення або знаками «+» (зазвичай від одного до чотирьох).

Непряма гемагглютинация — один з методів діагностики

Методи серологічних досліджень:

• Агглютинация. Зв’язування Ат з Аг з подальшим формуванням пластівців або осаду. Застосовуються прямі, непрямі, розгорнуті, орієнтовні реакції, що дозволяють виявити антитіла в сироватці.
• гемаглютинації. Використовуються еритроцити з адсорбованими на них Аг або Ат, які склеюються з відповідними Ат і Аг. Утворені комплекси випадають у вигляді фестонного осаду.
• Преципитация. Освіта комплексу Аг-Ат з подальшим осадженням у вигляді помутніння, іменованого преципітатом.
• коагглютинации. Виявлення Аг за допомогою Ат, адсорбованих на білку клітин стафілокока.
• Гальмування гемаглютинації. Ат імунної сироватки пригнічують вірусні Аг, в результаті віруси втрачають здатність склеюватися з еритроцитами.
• Непряма реакція Кумбса. Визначаються Ат до поверхневих Аг еритроцитів.
• кольцепреціпітаціі. Проводиться на основі імунної сироватки з нашаруванням розчинної Аг.
• Подвійна радіальна іммунодіффузія. Реакція заснована на диффундирования компонентів антисироватки і Аг в лунках агару або агарози.
• Реакція зв’язування комплементу. Зв’язок Аг і Ат супроводжується адсорбцією комплементу, як індикатор використовуються еритроцити барана і Ат до них в складі гемолітичної сироватки.
• Нейтралізація. Заснована на нейтралізації вірусного агента антитілами.
• Реакції, засновані на маркуванні Ат і Аг флуоресцентним або ферментним складом — іммунофлюорісцентний (РІФ) та імуноферментний (ІФА) методи.

Іммунофлюорісцентний метод.

«Світіння» в темнопольному мікроскопі

Даний метод заснований на використанні Ат, мічених флуоресцентним речовиною. Найчастіше в якості мітки використовується флуоресцеінізотіоціонат, що володіє зеленим світінням в променях ультрафіолету. Результат аналізу оцінюється за ступенем яскравості світіння. Може бути використаний ручний метод визначення за допомогою люмінесцентного мікроскопа, оптичного мікроскопа з люмінесцентної насадкою, а також автоматичний спосіб із застосуванням мікрочіповие цітомера, проточного цітомера або роботизованого флуоресцентного мікроскопа.

РИФ проводиться прямим і непрямим методом. Прямий спосіб означає безпосереднє зв’язування сорбованої Аг з міченим Ат. Непрямий метод передбачає використання немаркованих Ат для зв’язки з Аг, а потім додавання мічених Ат, що дозволяє уникнути неспецифічних реакцій.

Імуноферментний аналіз.

Імуноферментний аналіз як метод серологічної діагностики

ІФА заснований на виявленні комплексів Аг-Ат за допомогою маркування одного з компонентів. В якості мітки використовуються різні ферменти, які в результаті ферментативної реакції утворюють фарбування. Існують різноманітні методи ІФА, їх можна класифікувати як гомогенні і гетерогенні методи.

Гомогенні означають, що всі етапи реакції відбуваються в розчині.

Гетерогенні методи включають поділ на фази з використанням твердого носія.

гомогенності-гетерогенні способи грунтуються на тому, що комплекси Аг-Ат формуються в розчині, а потім для поділу використовується тверда фаза.

Принцип «сендвіч» -методу

Існує безліч варіацій методів ІФА, деякі з них представлені нижче.

1. Сендвіч-метод. До іммобілізованим Ат додається розчин з Аг, після утворення комплексів носій відмивають від зайвих компонентів і додають марковані Ат. В результаті, Аг виявляються затиснутими іммобілізованими і міченими Ат, звідки і пішла назва методу.
2. неконкурентний непрямий ІФА. До іммобілізованим Аг приєднують досліджувану сироватку з Ат. Коли утворюються комплекси, зайві Ат змивають і додають марковані Ат, здатні зв’язатися з прикріпленими до поверхонь лунок імунними комплексами.
3. Конкурентний прямий ІФА. До іммобілізованим Аг вносять досліджувану сироватку і кон’югат, що містить маркіровані Ат. Формуються комплекси Аг-Ат декількох видів: з міченими Ат і з немаркованими Ат, які вступають між собою в конкуренцію за зв’язок з Аг.

Які інфекції допомагає виявити серологічне дослідження.

Серологічна діагностика дозволяє виявити збудника

СІ дозволяють виявити певне захворювання при наявності на нього підозри, тобто в основі аналізу лежить знання того, який саме елемент необхідно шукати.

Якщо у пацієнта присутній певна симптоматика або інші дослідження вказують на захворювання, призначається серологічний аналіз.

Серологічні дослідження використовують для діагностики наступних інфекцій:

• вірус гепатиту А, В, С, D, Е.
• сифіліс.
• ВІЛ.
• герпес.
• цитомегаловірус.
• краснуха.
• кір.
• паротит.
• Епштейн-Барр.
• хелікобактер.
• хламідії.
• мікоплазми.
• токсоплазми.
• лямблії.
• гельмінти.
• уреаплазми.
• парвовирус.
• вірус вітряної віспи.
• вірус кліщового енцефаліту.
• вірус Денге.
• коклюш.
• боррелии.
• легионелли.

Серологічні дослідження здатні виявити будь-які інфекції в лабораторних умовах, якщо в наявності є Аг збудника інфекції.

Переваги серологічного методу дослідження в діагностиці інфекцій.

Серологічна діагностика — швидко і доступно

1. Висока чутливість і специфічність.
2. Широкий спектр визначених інфекцій.
3. Рання діагностика інфікування.
4. Можливість моніторингу розвитку захворювання.
5. Швидкість і зручність у виконанні.
6. Можливість використання мінімального обсягу досліджуваного матеріалу.
7. Безпека дослідження.